Se sentèz asid nikleyik la te fèt lè l sèvi avèk metòd trigliserid amid amid solid faz, kote 3′ fen ADN la imobilize sou yon substra faz solid epi yo ajoute nukleotid nan direksyon 3′ a 5′ jiskaske yo sentetize fragman ADN vle a. .Sa a diferan de sentèz ADN pa aplikasyon ADN polymerase.
Se 3′ fen premye baz la imobilize sou CPG pandan sentèz, 5′-OH nan pwochen baz la pwoteje ak di-p-tolyl trityl DMT, gwoup amine sou baz la pwoteje ak asid benzoik ak 3′. Lè sa a, -OH aktive ak yon konpoze fosfat amine.1 baz 5 5′-OH nan 1 baz la ak 3′-OH nan pwochen baz la fòme yon trigliserid fosfit, ki Lè sa a, soksid ak yòd nan yon trigliserid fosfat, pwoteksyon an sou dezyèm baz la 5′-OH retire pa ajoute sik dichloroacetic asid DM nan adisyon nan pwochen baz la, epi apre sentèz pwoteksyon an sou 5′-OH la retire ak yon asid fèb Fragman an dekonekte nan résine solid la ak idroksid amonyòm konsantre, pwoteksyon an retire nan baz la. ak idroksid amonyòm konsantre anba chofaj, idroksid amonyòm yo retire, fragman an seche vakyòm, epi asid nikleyik la pirifye pa likid chromatografi oswa PAGE.
Etap nan sentèz Oligo
Debloke
La5 fen DMT pwoteje gwoup retire lè yo ajoute solisyon TCA.
Aktivasyon
Melanje activateur a ak monomère oligonukleotid la pou fòme entèmedyè monomère oligonukleotid aktif la.
Couplage
Gwoup hydroxyl 5-tèminal reyaji ak entèmedyè oligonukleotid aktif nan yon reyaksyon kondansasyon anti-jeneratif pou fòme yon lyezon trigliserid fosfit ki pa estab.
Limitasyon
Anplis de sa nan yon ajan capping fè yon reyaksyon acetylation capping ak gwoup idroksil depase ki pa patisipe nan reyaksyon kondansasyon an.
Oksidasyon
Anplis de sa a nan solisyon yòd ki gen dlo reyaji ak lyezon fosfit enstab pa oksidasyon yo fòme lyezon trigliserid asid fosfò ki estab.
Klivaj Cyanoethyl
Pwodwi asid nikleyik apre sentèz, ak adisyon solisyon DEA pou retire gwoup cyanoethyl la nan kosyon trigliserid fosfat la.
Cleaved&Deprotection
Fragman asid nikleyik yo koupe nan transpòtè faz solid lè yo ajoute yon solisyon idroksid amonyòm konsantre epi yo chofe pou retire gwoup pwoteksyon yo nan lyezon idwojèn baz yo.
Tan pòs: 21-Nov-2022